Mackie wurde in New Orleans im US-Bundesstaat Louisiana geboren. Er besuchte die New Orleans Center for Creative Arts und später die Juilliard School.
Nach einigen Theaterrollen (er hat u. a. mit Don Cheadle zusammen gespielt) bekam Mackie 2003 seine erste große Rolle in dem Independentfilm Brother to Brother, der sich mit den Problemen eines homosexuellen Afroamerikaners, gespielt von Mackie, auseinandersetzt. Es folgten Rollen in Filmen wie 8 Mile, Spike Lees She Hate Me, Clint Eastwoods Million Dollar Baby, Das Gesicht der Wahrheit mit Samuel L. Jackson und der Rapper-Biografie Notorious B.I.G., in der er die Rapperlegende Tupac Shakur spielt.
Seinen bisher größten Erfolg hatte Mackie in Kathryn Bigelows mehrfach ausgezeichnetem Kriegsdrama Tödliches Kommando – The Hurt Locker. Hier spielt Mackie ein Mitglied eines Bombenentschärfungsteams, das in einem Krisengebiet im Irak stationiert ist. Für seine Darstellung wurde er u. a. für den Screen Actors Guild Award nominiert, den Image Award und Black Reel Award ausgezeichnet.
In der 2014 erschienenen Comicverfilmung The Return of the First Avenger war Mackie an der Seite von Chris Evans in der Rolle des Samuel Wilson/Falcon zu sehen. Dieselbe Rolle übernahm er auch in den Filmen Avengers: Age of Ultron, Ant-Man (beide 2015) und in The First Avenger: Civil War (2016).
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Filme
2027 – Avengers: Secret Wars
2026 – Avengers: Doomsday
2026 – Matīss Kaža. Neiespējamais pašportrets
2026 – Desert Warrior
2025 – Sneaks
2025 – The Electric State
2025 – Captain America: Brave New World
2024 – Elevation
2024 – Der Strand der Haie mit Anthony Mackie: Golfküste
2024 – If You Were the Last
2023 – Zeitlose Helden: Indiana Jones & Harrison Ford
2023 – Disney 100: Remember That
2023 – Ghosted
2023 – We Have a Ghost
2022 – Celebrating Betty White: America's Golden Girl
2021 – Marvel Studios' 2021 Disney+ Day Special
2021 – The Woman in the Window
2021 – Outside the Wire
2020 – Synchronic - Zeit ist eine Illusion
2020 – Creating a Character: The Moni Yakim Legacy
2020 – The Banker
2019 – Celebrating Marvel's Stan Lee
2019 – Against All Enemies
2019 – Marvel Studios: Expanding the Universe
2019 – Point Blank
2019 – Avengers: Endgame
2019 – Miss Bala
2019 – IO
2018 – The Hate U Give
2018 – Avengers: Infinity War
2017 – Detroit
2016 – Der lange Weg
2016 – The First Avenger: Civil War
2016 – Triple 9
2015 – Die Highligen drei Könige
2015 – Alle Jahre wieder - Weihnachten mit den Coopers
2015 – Die Wahlkämpferin
2015 – Ant-Man
2015 – Avengers: Age of Ultron
2015 – Black or White
2014 – Playing it Cool
2014 – Shelter
2014 – On Set with Anthony Mackie: Cut the Check!
2014 – Steve Rogers' Notebook
2014 – The Return of the First Avenger
2014 – Marvel Studios: Assembling a Universe
2014 – Repentance - Tag der Reue
2013 – Inside WikiLeaks - Die fünfte Gewalt
2013 – Mister & Pete gegen den Rest der Welt
2013 – Runner Runner
2013 – Pain & Gain
2013 – Gangster Squad
2012 – 10 Jahre - Zauber eines Wiedersehens
2012 – Abraham Lincoln - Vampirjäger
2012 – Goose
2012 – Ein riskanter Plan
2011 – Der perfekte Ex
2011 – Real Steel
2011 – Der Plan
2010 – Night Catches Us
2010 – Louis
2009 – Wüstenblume
2009 – Notorious B.I.G.
2008 – Tödliches Kommando – The Hurt Locker
2008 – Eagle Eye – Außer Kontrolle
2008 – American Violet
2006 – Sie waren Helden
2006 – Crossover
2006 – Half Nelson
2006 – Heavens Fall
2006 – Das Gesicht der Wahrheit
2005 – Cool & Fool - Mein Partner mit der großen Schnauze
2005 – Born to Fight
2004 – Million Dollar Baby
2004 – Sucker Free City
2004 – Haven
2004 – Der Manchurian Kandidat
2004 – She Hate Me
2004 – Brother to Brother
2003 – Hollywood Cops
2002 – 8 Mile
Barracuda
Clybourne Park
Raven
Spark
Speed the Plow
The Ogun Serien
2026 – 12 12 12
2025 – The Studio
2024 – Hot Ones Versus
2023 – Off Script with The Hollywood Reporter
2023 – Twisted Metal
2023 – Rennervations
2022 – Sherri
2022 – The Jennifer Hudson Show
2021 – Das Tier
2021 – What If…?
2021 – Solos
2021 – The Falcon and the Winter Soldier
2021 – Marvel Studios: Gemeinsam unbesiegbar
2021 – The Eisen Hour
2021 – Marvel Studios: Legends
2019 – The Kelly Clarkson Show
2019 – Desus & Mero
2018 – Altered Carbon – Das Unsterblichkeitsprogramm
2016 – Animals
2015 – The Late Show with Stephen Colbert
2015 – Hot Ones
2014 – Variety Studio: Actors on Actors
2014 – Bear Grylls - Stars am Limit
2014 – Late Night with Seth Meyers
2014 – The Tonight Show Starring Jimmy Fallon
2011 – Black Mirror
2010 – Conan
2009 – Watch What Happens Live with Andy Cohen
2009 – Late Night with Jimmy Fallon
2007 – The Graham Norton Show
2006 – El hormiguero
2003 – Jimmy Kimmel Live!
2002 – CMT Music Awards
2001 – Criminal Intent – Verbrechen im Visier
1996 – The Daily Show
1992 – MTV Movie & TV Awards
1988 – LIVE with Kelly and Mark
1959 – The Grammys
1944 – Golden Globe Awards